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對電泳儀的一些誤差來源分析
點擊次數(shù):2727 更新時間:2022-11-25
電泳是指帶電荷的溶質(zhì)或粒子在電場中向著與其本身所帶電荷相反的電極移動的現(xiàn)象。利用電泳現(xiàn)象將多組分物質(zhì)分離、分析的技術(shù)叫做電泳技術(shù)??梢詫崿F(xiàn)電泳分離技術(shù)的儀器稱之為電泳儀。
凝膠電泳是分子生物學(xué)中用于DNA分析的主要方法之一。此方法涉及DNA片段通過凝膠的遷移,在凝膠中它們根據(jù)大小或形狀分開。但是,即使是科學(xué)上合理的方法,例如凝膠電泳,也無法避免產(chǎn)生誤差,對于誤差的常見因素如下:
1.樣品污染
電泳法的主要應(yīng)用是在分子生物學(xué)中分析DNA的工具,但在法醫(yī)學(xué)中也用作鑒定違法現(xiàn)場樣本的手段。為了獲得準(zhǔn)確的結(jié)果,小化此技術(shù)中的錯誤來源很重要。錯誤的來源之一是DNA樣品的污染。如果樣品中有外源DNA,則凝膠中的條帶比僅包含純化樣品的凝膠中的帶多。
2.凝膠、電流和緩沖液問題
電源穩(wěn)壓器用于保持凝膠電泳中的電壓穩(wěn)定。凝膠的濃度也必須正確以避免錯誤。如果濃度太高或太低,碎片將遷移得太慢或太快。這將導(dǎo)致解析不同頻段時出現(xiàn)錯誤。在電泳過程中,必須注意確保電壓穩(wěn)定。電壓的任何波動都將導(dǎo)致DNA片段不穩(wěn)定遷移,從而導(dǎo)致條帶讀取錯誤。緩沖溶液還必須具有正確的組成,因為具有錯誤pH或離子濃度的緩沖液會改變DNA片段的形狀,并改變其遷移時間。
3.正確的可視化
可視化凝膠中的每個條帶代表一組大小相同的DNA片段。重要的是凝膠必須正確可視化。如果用于可視化樣品的染料或放射性探針的濃度太高,則生成的圖像將非?;靵y,因為殘留碎片也將可視化。如果凝膠濃度太低,將無法可視化。在所有階段都遵循正確的過程后,凝膠電泳儀將得出準(zhǔn)確且可以放心使用的結(jié)果。